波尔山羊活体采卵及卵母细胞体外成熟培养
2018-10-23 返回列表
根据供体羊体重大小 , 用 2 1 5 ～ 5 1 0 ml 速眠新麻醉剂进行颈部肌肉注射 , 注射 20 min 后将已麻醉供体羊仰面捆绑在手术架上 , 剃毛 , 以皂液和水清洗拟手术皮肤表面 , 尔后分别用碘伏和酒精棉球消毒 , 于腹中线两侧近乳房处手术切口约 6 cm , 用自制的美国原进口活体采卵仪EVO
( 该器械由采卵针、采卵导管、集卵管与管内含肝素抗凝剂的杜氏 PBS 液、流量调节阀以及吸引器 5 部分结构组成 ,进行。采卵前首先调节好吸引器流量 ( 约 0 1 5 ml/ s 左右) ,用活体采卵仪EVO针直接刺入肉眼可见的卵泡腔内吸取卵泡里的卵母细胞2卵丘细胞复合物。将收集的含有卵母细胞的采卵液转入壁侧带有滤网的集卵杯中 , 再用 3 倍体积的新鲜采卵液冲释 , 静止数分钟后在实体显微镜下分检出卵母细胞 , 用卵母细胞培养液洗 3 次 , 将卵母细胞转入四孔培养板孔内已平衡好的以矿物油覆盖的卵母细胞成熟培养液中 , 置 CO 2培养箱内培养(381 5 ℃、 5 %CO 2 、 95 % 空气 ) 27 h 左右 , 间断观察卵母细胞成熟情况。以卵丘细胞呈典型的辐射性扩散和倒置显微镜下卵母细胞排出第 1极体作为判断卵母细胞已发育成熟的标准。成熟卵母细胞用 300 IU/ ml 透明质酸酶液清洗 , 去除松散态颗粒细胞 ( 保留致密的 2 ～ 3 层颗粒细胞 ) 。然后用波尔山羊活体采卵与卵母细胞体外受精技术卵母细胞清洗液清洗 3 次 , 待体外受精处理。
